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PCR 技术的基本原理

       PCR — 聚合酶链式反应
       优点:方法操作简单,反应快速敏捷,结果可靠
       原理:与细胞内发生的DNA复制过程十分相似。

       是在模板、引物和4种dNTP(包含A、T、C、G四种碱基的脱氧核苷酸)存在条件下,依赖于DNA聚合酶体外扩增目的DNA的反应。
 
       模板:是指包含待扩增片段(目的片段)的一段DNA,可以是细菌和病毒的基因组DNA,细菌质粒DNA,也可以是病毒RNA经体外逆转录后形成的cDNA。

       引物:是指与目的片段两翼互补的一对单链DNA片段,一般由17-30个寡核苷酸组成。

       DNA聚合酶:耐热。商品化名称为Taq 酶

       PCR反应的3个步骤
       变 性(denaturation): 通过加热使DNA双链解开,成为单链DNA的过程
       退 火(annealing):反应混合液冷却至某一合适的温度,两个引物分别与两条单链模板的互补区域结合的过程  
       延 伸(elongation):反应温度再次升高,在DNA 聚合酶的作用下、 Mg2+存在的条件下,4种dNTP从引物的3’端开始参入,引物沿5’-3’方向延伸,合成出新生的DNA互补链。

 

       摘自本公司论坛——芯片上的实验室:http://www.pmmachip.com


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